婴儿双歧杆菌介导的sKDR原核克隆表达及其对血管内皮细胞增殖的影响

作者：毛淑华; 姬玲玲; 刘洪; 徐一洲; 黄煌; 黄英; 易成

来源：四川大学学报（医学版）, 2009, 40(05): 784-786+802.

• 婴儿双歧杆菌
• 抗血管生成
• 血管内皮生长因子(VEGF)
• 可溶性血管内皮生长因子受体(sKDR)
• 血管内皮细胞

目的构建婴儿双歧杆菌介导的sKDR基因肿瘤靶向性转运系统并观察其对血管内皮细胞增殖的影响。方法PCR扩增sKDR基因,提取与纯化pET32a质粒。EcoRⅠ和XhoⅠ对sKDR基因和pET32a质粒分别进行双酶切,用T4DNA连接酶将目的基因片段和载体连接。电穿孔法将连接反应物转染婴儿双歧杆菌。厌氧培养重组质粒转化菌,并将其处理液加入由VEGF诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)培养基中培养24h,MTT比色法测定细胞存活率。结果PCR、酶切鉴定及核酸测序结果表明,获得了含pET32a-sKDR重组质粒的婴儿双歧杆菌;RT-PCR及SDS-PAGE电泳结果证实sKDR在基因及蛋白水平成功表达。与空质粒对照组相比,重组质粒转化菌处理液可明显抑制HUVECs增殖(P<0.01)。结论成功构建了婴儿双歧杆菌介导的sKDR基因转运系统,体外实验证实其可明显抑制血管内皮细胞的增殖。

• 单位
  四川大学; 四川大学华西医院