冷冻保存对NK细胞活率及其肿瘤杀伤效果的影响

作者：刘春香; 张怡^*

来源：中国免疫学杂志, 2021, 37(24): 3010-3014.

• 新鲜NK
• 冻存NK
• 细胞活率
• 肿瘤杀伤活性

目的:对比新鲜及冻存复苏的NK细胞的存活率及肿瘤杀伤效果,以便评价冻存的同种异体NK细胞作为即用型产品应用于临床治疗的可行性。方法:利用台盼蓝染色法对冻存前、冻存3个月复苏后及复苏后4℃存放24 h时NK细胞进行存活率检测;通过ELISA方法对冻存前后NK细胞IFN-γ表达量检测;利用流式细胞术对其表面活化性受体表达情况进行检测的同时利用RTCA S16系统检测其对A549肿瘤细胞的杀伤作用。结果:冻存复苏后细胞活率为(92.17±1.37)%,复苏后4℃保存24 h后仍为(79.97±1.22)%;新鲜NK和冻存NK细胞的IFN-γ分泌量分别为(5 967.0±517.8)pg/ml和(4 861.0±941.4)pg/ml,二者未见显著性差异(P>0.05),同时,NK细胞冻存后受体NCR2及NKG2D较冻存前均未有明显下降;对A549细胞的杀伤作用中,效靶比(E∶T)为10∶1和5∶1时,冻存复苏NK的杀伤效果与新鲜培养NK细胞无显著性差异,仅在高效靶比(E∶T=20∶1)时冻存NK杀伤作用低于新鲜NK的杀伤作用(P<0.05)。结论:经过对比研究表明,冷冻保存的NK细胞满足临床应用所要求的活率和高效杀伤肿瘤细胞能力,可以发展成为即用型细胞药物,具有广泛的临床应用前景。