骨肉瘤MG63细胞中VEGF-C/VEGFR-3/iNOS信号转导对人脐静脉内皮细胞增殖的促进作用（英文）

作者：吕杰; 原杰; 徐朝健; 郝家齐; 秦一川; 王小强; 王永峰^*

来源：Chinese Medical Sciences Journal, 2021, 36(01): 35-43.

• 骨肉瘤
• 血管内皮生长因子-C
• 血管内皮生长因子受体-3
• 诱导型一氧化氮合酶
• 肿瘤血管生成

目的探讨血管内皮生长因子-C(vascular endothelial growth factor–C,VEGF-C)/血管内皮生长因子受体-3(vascular endothelial growth factor receptor–3,VEGFr-3)信号转导对人骨肉瘤MG63细胞中一氧化氮(nitric oxide,NO)的生成和诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,i NOS)的表达以及对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)增殖的影响。方法 MG63细胞分别以VEGF-C单独处理(VEGF-C组),VEGF-C联合i NOS抑制剂氨基胍aG(aG组)以及VEGF-C联合VEGFr-3抑制剂MaZ-51(MaZ-51组)处理,将未处理的MG63细胞作为对照。采用硝酸还原酶比色法测定NO生成量,逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,rtPCr)和Western blot分别检测iNOS的mrNa和蛋白水平。为研究MG63细胞中VEGF-C/VEGFr-3/iNOS信号通路对HUVECs增殖的影响,实验设立如下6组:HUVECs组、HUVECs+MG63组、HUVECs+VEGF-C组、HUVECs+MG63+VEGF-C组、HUVECs+MG63+VEGF-C+aG组及HUVECs+MG63+VEGF-C+MaZ51组。用细胞计数试剂盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)、5-乙炔基-2’-脱氧尿嘧啶核苷(5 ethynyl 2’deoxyuridine,EdU)掺入法和增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNa)定量表达评估各组HUVECs的增殖情况。结果 VEGF-C促进了MG63细胞中i NOS在基因(LSD-t=4.152,P<0.01)和蛋白水平的表达(LSD-t=3.486,P <0.01),增加了NO释放(LSD-t=3.774,P <0.01)。经aG或MaZ51处理均可降低上述作用(mrNa:LSD-t=9.183,P <0.001;LSD-t=8.639,P <0.001;protein:LSD-t=5.170,P <0.001;LSD-t=7.255,P <0.001;NO:LSD-t=10.326,P <0.001;LSD-t=10.540,P <0.001)。HUVECs与MG63细胞和/或VEGF-C共同培养可显著促进HUVECs的增殖(EdU:LSD-t=5.374,P<0.001;LSD-t=2.984,P<0.05;LSD-t=8.526,P<0.001;PCNa:LSD-t=9.267,P <0.001;LSD-t=5.515,P <0.001;LSD-t=14.873,P <0.001)。经aG(EdU:LSD-t=10.770,P <0.001;PCNa:LSD-t=19.940,P <0.001)或MaZ 51(EdU:LSD-t=6.950,P <0.001;PCNa:LSD-t=14.001,P <0.001)处理后,MG63细胞和VEGF-C对HUVECs增殖的诱导作用减弱。结论 VEGF-C激活VEGFr-3可促进在人骨肉瘤MG63细胞i NOS的表达和NO的产生,进而诱导HUVECs的增殖。

• 单位
  山西医科大学第二医院