p LA-PEDV-S1质粒拷贝数与发酵重组乳酸菌S1表达量之间的相关性研究

作者：窦速林; 刘卫贞; 侯喜林; 张冰冰; 王桂华; 余丽芸^*

来源：微生物学杂志, 2018, 38(05): 27-33.

• 重组干酪乳杆菌
• 荧光定量PCR
• 质粒拷贝数
• S1蛋白的表达量

探究质粒拷贝数以及目标蛋白S1表达量与发酵时间的关系,从而确定放大生产p LA-PEDV-S1/Lactobacillus casei的最佳发酵时间。通过发酵重组干酪乳杆菌,绘制重组干酪乳杆菌的生长曲线,确定其生长的最佳时期。将p LA-PEDV-S1/L. casei分别接种至添加抗生素和不添加抗生素的MRS培养基中传代培养,进行稳定性实验。使用荧光定量PCR方法检测重组干酪乳杆菌中质粒的拷贝数,使用流式细胞术检测乳酸菌表达的目标蛋白。重组菌在7 h达到生长顶点,传至120代时外源质粒并无丢失情况出现。质粒拷贝数在9 h达到峰值29. 34,表达目标蛋白的重组菌在7 h达到峰值97. 98%。结果显示在细菌生长的对数生长期末期,质粒拷贝数最高且S1表达量最多;在平台期随着发酵时间的增加,质粒拷贝数逐渐降低,S1表达量也相应减少。发酵的最佳时间为7～10 h,质粒拷贝数与S1表达量之间存在着正相关性。

• 单位
  动物科技学院; 生命科学技术学院; 黑龙江八一农垦大学