烟草环斑病毒RT-PCR检测体系的优化

作者：郇晓雪; 刘晓宇; 房乐; 杜传印; 李广强; 耿超; 李向东; 田延平^*

来源：山东农业科学, 2021, 53(06): 98-102.

DOI：10.14083/j.issn.1001-4942.2021.06.017

• 烟草环斑病毒
• 检测体系
• 逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)
• 优化

烟草环斑病毒(Tobacco ringspot virus,TRSV)是豇豆花叶病毒科(Comoviridae)线虫传多面体病毒属(Nepovirus)的代表种,是我国公布的二类进境检疫有害生物。建立特异性强、灵敏性高的检测体系是有效控制TRSV传播的技术保障。本研究在分析引物的特异性、优化退火温度及dNTPs、引物、Taq DNA聚合酶浓度的基础上,建立了完善的TRSV RT-PCR检测体系。筛选出的TRSV特异性引物对为1-1F/1-1R,在退火温度为53℃、dNTPs终浓度为0.075 mmol/L、引物终浓度为0.30μmol/L、Taq DNA聚合酶终浓度为0.035 U/μL条件下检测效率最高,可从发病植物总RNA量为0.090 ng中检测到目的片段。研究结果对准确灵敏地检测TRSV具有重要意义。

• 单位
  山东农业大学