SIRT1/NLRP3信号通路在七氟烷后处理减轻HT22细胞氧糖剥夺-复氧复糖损伤中的作用

作者：万晓静; 张丽; 胡溯; 吴雨洁; 牛志伦; 张一鸣; 胡宪文^*

来源：中华麻醉学杂志, 2023, 43(06).

• 抗衰老酶1
• NLR家族, 热蛋白结构域包含蛋白3
• 七氟醚
• 缺血后处理
• 神经元
• 低氧

目的评价沉默信息因子1(SIRT1)/NOD样受体蛋白3(NLRP3)信号通路在七氟烷后处理减轻小鼠海马神经元(HT22细胞)氧糖剥夺-复氧复糖(OGD/R)损伤中的作用。方法培养HT22细胞, 以5×104个/ml的密度接种于培养板或培养皿, 采用随机数字表法分为4组(n=24):空白对照组(Control组)、氧糖剥夺-复氧复糖组(OGD/R组)、七氟烷后处理组(SPC组)和SIRT1小干扰RNA组(si-SIRT1组)。Control组将细胞置于37 ℃常氧培养箱中培养, OGD/R组将细胞培养基更换为无糖无血清培养基, 置于37 ℃培养箱(95%N2+5%CO2)中培养4 h, 随后将无糖无血清培养基更换为原细胞培养基, 置于37 ℃常氧培养箱中继续培养24 h制备氧糖剥夺-复氧复糖损伤模型, SPC组在细胞氧糖剥夺4 h后将无糖无血清培养基更换为原细胞培养基, 将细胞放入缺氧小室中, 在复氧即刻向小室内充入2%七氟烷, 之后将小室置于37 ℃常氧培养箱中培养1 h, 最后将细胞从缺氧小室中取出, 置于常氧培养箱中继续培养23 h进行七氟烷后处理, si-SIRT1组于实验前24 h时加入SIRT1小干扰RNA 150 pmol孵育, 其余操作同SPC组。采用MTT法检测细胞存活情况, TUNEL染色检测细胞凋亡情况, 采用PCR法检测SIRT1、NLRP3、IL-1β和IL-18的mRNA表达, 采用Western blot法检测SIRT1、NLRP3、IL-1β和IL-18的表达。结果与Control组比较, OGD/R组细胞存活率降低, 细胞凋亡率升高, SIRT1及其mRNA表达下调, NLRP3、IL-1β和IL-18及其mRNA表达上调(P<0.05);与OGD/R组比较, SPC组细胞存活率升高, 细胞凋亡率降低, SIRT1及其mRNA表达上调, NLRP3、IL-1β和IL-18及其mRNA表达下调(P<0.05);与SPC组比较, si-SIRT1组细胞存活率降低, 细胞凋亡率升高, SIRT1及其mRNA表达下调, NLRP3、IL-1β和IL-18及其mRNA表达上调(P<0.05)。结论 SIRT1/NLRP3信号通路激活参与了七氟烷后处理减轻HT22细胞OGD/R损伤的过程。

• 单位
  安徽医科大学第二附属医院