人腺苷激酶在大肠杆菌中的表达与纯化

作者：黄湘; 马瑞娟; 孙敏英; 杨学习

来源：热带医学杂志, 2010, (01): 34-36+44.

• 腺苷激酶
• 表达
• 纯化
• 包涵体
• 复性 human adenosine kinase
• expression
• purification
• inclusion body
• refolding

目的诱导人腺苷激酶重组蛋白在大肠杆菌中表达,并对表达的重组蛋白进行纯化。方法将由人腺苷激酶基因开放阅读框与原核表达载体pET30a( )连接构建的重组蛋白表达载体pET30a( )/ADK转化大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)感受态细胞。1mmol/L的IPTG诱导重组蛋白表达。离心收集菌体后结合使用溶菌酶、冻融和超声破碎的方法裂解菌体。用含2mol/L和4mol/L尿素的结合缓冲液洗涤包涵体去除部分杂蛋白。随后用含8mol/L尿素的结合缓冲液变性溶解剩余包涵体沉淀。用Ni-NTA柱通过亲和层析纯化重组蛋白,用含8mol/L尿素的洗脱缓冲液洗脱,收集样品透析复性。结果成功构建人腺苷激酶原核表达...

• 单位
  南方医科大学; 嘉应学院医学院