miR-155/PTEN轴在高糖诱导HRCEC凋亡中的作用及机制

作者：蔡文丽; 谢红波^*

来源：中国中医眼科杂志, 2022, 32(05): 337-363.

DOI：10.13444/j.cnki.zgzyykzz.2022.05.001

• 糖尿病视网膜病变
• 视网膜微血管内皮细胞
• miR-155
• 凋亡
• 磷脂酶和张力蛋白同源物
• 靶基因

目的 研究微小RNA-155(miR-155)/磷脂酶和张力蛋白同源物(PTEN)在高糖诱导视网膜微血管内皮细胞(HRCEC)凋亡中的作用及机制。方法 培养HRCEC并分为miRNC组、miR-NC+高糖组、miR-155+高糖组、miR-NC+空白质粒组、miR-NC+空白质粒+高糖组、miR-155+空白质粒组+高糖组、miR-155+PTEN质粒组+高糖组，转染阴性对照(NC)序列、miR-155模拟物、空白质粒、PTEN质粒。转染后，采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测miR-155表达水平，四唑氮化合物(MTS)法检测细胞活力，原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测细胞凋亡率，Western Blot检测PTEN、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)表达水平，双荧光素酶报告基因验证miR-155靶向PTEN基因mRNA 3’UTR。结果 (1)miR-155表达：与miR-NC+高糖组比较，转染miR-155模拟物显著增加高糖环境下HRCEC中miR-155的表达，差异具有统计学意义(t=4.069,P=0.004);(2)细胞活力：与miRNC+高糖组比较，转染miR-155模拟物显著提高高糖环境下HRCEC的OD490水平、抑制细胞凋亡，差异均有统计学意义(tOD490=2.907,P=0.020;t凋亡率=5.957,P=0.000)；与miR-155+空白质粒组+高糖组比较，转染miR-155模拟物及PTEN质粒显著降低高糖环境下HRCEC的OD490水平、促进细胞凋亡，差异均有统计学意义(tOD490=3.777,P=0.005;t凋亡率=6.406,P=0.000);(3)PTEN通路：与miR-NC+高糖组比较，转染miR-155模拟物显著抑制高糖环境下HRCEC中PTEN的表达，增加p-AKT、eNOS的表达，差异均有统计学意义(tPTEN=3.855,P=0.005;tp-AKT=6.450,P=0.000;teNOS=4.875,P=0.001)。结论 高糖环境下HRCEC凋亡激活且miR-155表达减少、PTEN表达增加，过表达miR-155能够靶向抑制PTEN并抑制高糖诱导的HRCEC凋亡。

• 单位
  徐州市中医院