hK-Fc融合蛋白的改良、表达及其生物活性的分析

作者：周同; 陶建军; 李林国; 侯永敏; 余龙

来源：生物工程学报, 2009, (11): 1697-1704.

DOI：10.13345/j.cjb.2009.11.002

• 激肽释放酶
• hK'-Fc融合蛋白
• 血清半衰期
• 信号肽改造
• 酶活性 kallikrein
• hK'-Fc fusion protein
• serum half-life
• signal peptide
• bioactivity

为了延长人激肽释放酶(hK)的血清半衰期,提高分泌蛋白的产率,制备了重组激肽释放酶-IgG1 Fc融合蛋白(hK'-Fc)。采用PCR扩增hK基因和IgG1的Fc序列,用鼠源信号肽序列替换hK基因原有的信号肽序列,构建改良型融合蛋白hK'-Fc以及天然型融合蛋白hK-Fc的表达载体,转染中国仓鼠卵巢细胞(CHO)细胞,筛选稳定分泌融合蛋白的细胞株,通过Western blotting鉴定信号肽改造效果,利用Protein A+G亲合层析柱纯化融合蛋白,酶学实验检测融合蛋白的体外活性。结果表明:成功构建了pcDNA-hK'-Fc以及pcDNA-hK-Fc重组表达载体;获得了稳定表达融合蛋白的细胞...

• 单位
  广东天普生化医药股份有限公司; 遗传工程国家重点实验室; 复旦大学