水产品中副溶血性弧菌PMA-dd PCR活菌定量检测方法的研究

作者：翁文川; 管锦绣; 谢会; 凌莉; 陈文锐; 冼钰茵; 许喜林

来源：现代食品科技, 2019, 35(06): 273-190.

DOI：10.13982/j.mfst.1673-9078.2019.6.036

• 副溶血性弧菌
• 叠氮溴化丙锭
• 微滴式数字PCR

本研究旨在针对水产品中活的副溶血性弧菌建立一种快速定量的PCR检测方法。基于叠氮溴化丙锭(PMA)在一定光照条件下能抑制死亡菌DNA扩增,以及微滴式数字PCR技术能将检测精度扩展至单分子目标基因,并实现绝对定量的特点,以副溶血性弧菌tlh基因为目的片段设计及筛选适合的特异性引物与探针,优化反应体系,通过对PMA浓度及曝光条件等优化,建立了一种联用PMA-dd PCR技术快速检测水产品中活的副溶血性弧菌的定量检测方法。研究结果显示:选择16μg/m L作为PMA工作浓度,曝光时间为8 min,此条件下能够完全抑制副溶血性弧菌死菌的DNA扩增并对活菌扩增无影响。通过对比PMA-dd PCR和PMA-q PCR的检测低限分别为2×101 cfu/mL、2×102 cfu/mL,PMA-dd PCR法的灵敏度比PMA-q PCR法的高。应用PMA-dd PCR定量方法检测人工污染的基围虾和小帆立贝这两种海产品,在基围虾中最低可检出1.9×101 cfu/g的副溶血性弧菌、在小帆立贝中最低可检出8.9 cfu/g的副溶血性弧菌。该研究为将PCR技术实际应用于水产品中低量污染、活的副溶血性弧菌的定量检测奠定了基础。

• 单位
  广东检验检疫技术中心; 广州双螺旋基因技术有限公司; 华南理工大学