低出血倾向、低免疫原性葡激酶mSAK(K130T,K135R)的表达、纯化与活性测定

作者：郑玉玲; 宁保安; 马茹; 高志贤; 姜永强

来源：中国生物化学与分子生物学报, 2005, (05): 610-615.

DOI：10.13865/j.cnki.cjbmb.2005.05.008

• 葡激酶
• 免疫原性
• 低出血倾向 staphylokinase
• immunogenicity
• lower bleeding tendency

为了有效降低葡激酶应用的副作用,构建低出血倾向、低免疫原性葡激酶突变体,高效表达纯化后进行活性鉴定,以野生型重组葡激酶基因为模板,PCR法引入突变位点(K130T,K135R),并将该片段克隆测序鉴定后,克隆至表达载体pBV220,构建低免疫原性葡激酶突变体.表达后的蛋白用Q-SepharoseFF柱与SephacrylS-200进行纯化,纤维蛋白溶圈法进行活性测定,体外抗体中和试验与豚鼠免疫试验测定突变体蛋白的免疫原性,同时进行动物体内出血倾向观察.测序结果表明,相应位点获得突变,无非特异性突变,将突变后的片段连接pBV220导入大肠杆菌热激诱导获得了高效表达,表达产物占菌体总蛋白的40%~...

• 单位
  病原微生物生物安全国家重点实验室; 军事医学科学院