乙型肝炎病毒X蛋白对Polo样激酶1表达的调控作用

作者：屠静; 张婷; 程锦; 曾浈浈; 鲁凤民; 陈香梅^*

来源：中华肝脏病杂志, 2016, 24(01): 46-50.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1007-3418.2016.01.009

• 肝炎病毒, 乙型
• X蛋白
• Polo样激酶1
• 蛋白稳定性
• 表达

目的探索乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)对Polo样激酶1(Plk1)的表达调控作用。方法 pCMV-HA-HBx表达质粒瞬时或稳定转染HepG2细胞, Western blot检测HBx对Plk1蛋白水平的影响;采用荧光素酶活性实验检测HBx对Plk1基因启动子活性的影响, 实时荧光定量PCR检测HBx对Plk1 mRNA水平的影响;采用Cycloheximide阻断新蛋白合成后检测HBx对Plk1蛋白半衰期的影响;流式细胞仪技术检测HBx对细胞周期的影响。组间数据比较采用t检验。结果 Western blot结果显示, 瞬时和稳定表达外源HBx蛋白都能显著上调S期HepG2细胞的Plk1蛋白相对水平(1.242±0.133与2.683±0.396, P<0.05;1.340±0.128与3.683±0.349, P<0.01)。荧光素酶活性和实时荧光定量PCR实验证实, HBx对Plk1基因的转录水平无影响, 而Western blot实验证实HBx能抑制S期Plk1蛋白的泛素化降解, 使Plk1蛋白半衰期由30 min延长至90 min。与对照组相比, HBx过表达能促进S期和G2/M期细胞比例的增加(分别为31.65%与24.56%, 9.43%与4.47%), G0/G1期细胞比例的减少(58.92%与70.97%)。结论 HBx能通过抑制S期Plk1蛋白的降解进而上调Plk1蛋白的水平。

• 单位
  基础医学院