DJ-1shRNA表达载体的构建及其稳定转染人肝癌细胞HepG2细胞株的建立

作者：刘顺芳; 刘谨文; 易继林; 杨志芳; 殷茜; 李兴睿

来源：中华实验外科杂志, 2011, 28(8): 1306-1308.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1001-9030.2011.08.036

• DJ-1
• RNA干扰
• 癌,肝细胞

目的 构建DJ-1 shRNA真核表达载体,获得干扰质粒稳定转染的人肝癌HepG2细胞株.方法 合成DJ-1基因干扰序列,定向插入真核表达载体pGenesil-1质粒并测序鉴定;干扰质粒经脂质体介导转染人肝癌HepG2细胞,G418(450 mg/L)有限稀释法持续筛选8周后,扩增获得稳定转染的细胞株;荧光显微镜观察转染扩增效率;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测稳定转染细胞株的DJ-1 mRNA和蛋白的表达.结果 测序证明DJ-1干扰序列及读码框完全正确,G418筛选后扩增细胞中稳定转染扩增百分率高达75.00%.稳定转染细胞DJ-1mRNA表达下调,DJ-1蛋白抑制率为98.78%(P＜0.05).结论 成功构建DJ-1 shRNA真核表达载体,DJ-1 shRNA质粒稳定转染HepG2细胞株的建立,为以DJ-1基因为靶点的人肝癌基因研究提供实验基础.

• 单位
  华中科技大学同济医学院附属同济医院