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摘要
以黄鳝基因组DNA为模板,采用正交试验设计方法,对各反应因子、引物退火温度和循环参数进行优化。建立了黄鳝的最适ISSR-PCR反应体系,25μl反应体系中含2.5 mmol/L Mg2+,250μmol/L dNTPs,0.25μmol/L引物,1.0 UTaqDNA聚合酶,30 ng DNA模板。最佳反应程序:94℃预变性5 min;94℃变性40 s,48~57℃复性40 s(随引物而确定),72℃延伸1.5 min,循环次数40;72℃延伸10 min。利用所建立的ISSR反应体系,获得了清晰、重复性好、多态性高的DNA谱带。
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单位河南师范大学; 生命科学学院
