摘要
目的 获取温郁金凝集素(CWL)重组蛋白,并研究其对结肠癌细胞凋亡、迁移和侵袭的影响。方法 根据CWL基因全长编码序列,采用大肠杆菌原核表达系统重组表达及纯化CWL;观察CWL对兔红细胞的凝血作用;CCK-8法评价CWL(10、20、40、80μg·mL-1)对结肠癌HCT-116细胞的毒性;流式细胞仪检测CWL(40、80μg·mL-1)对HCT-116细胞凋亡的影响;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell小室法检测细胞侵袭能力;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)实验分析Caspase-3、 Caspase-9、 BAX、 PARPmRNA表达水平;Westernblotting检测cleaved-Caspase-3、cleaved-Caspase-9、BAX、cleaved-PARP蛋白表达水平。结果 重组纯化获得相对分子质量为3×104的CWL;高质量浓度的CWL导致红细胞出现明显的凝血情况,随着CWL质量浓度的降低,其凝血活性逐渐下降,直至消失。与对照组比较,CWL对HCT-116细胞活性具有显著抑制作用(P<0.001);40、80μg·mL-1 CWL可显著降低HCT-116细胞的迁移和侵袭能力(P<0.001),显著升高HCT-116细胞凋亡率(P<0.01、0.001);显著升高Caspase-3、Caspase-9、BAX、PARP的mRNA表达水平(P<0.05、0.01、0.001),同时显著增加cleaved-Caspase-3、cleaved-Caspase-9、BAX、cleaved-PARP蛋白表达水平(P<0.05、0.01)。结论 CWL可通过线粒体凋亡途径促进HCT-116细胞凋亡并抑制其迁移和侵袭,从而发挥抗肿瘤作用。
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