温郁金凝集素蛋白重组及对结肠癌HCT-116细胞凋亡、迁移和侵袭的影响

作者：周丹; 张丽萍; 丰梦熠; 朱强; 任仙樱; 吴志刚; 姜程曦^*

来源：药物评价研究, 2023, 46(11): 2366-2373.

• 温郁金凝集素
• HCT-116细胞
• 凋亡
• 迁移
• 侵袭
• 线粒体凋亡

目的 获取温郁金凝集素（CWL）重组蛋白，并研究其对结肠癌细胞凋亡、迁移和侵袭的影响。方法 根据CWL基因全长编码序列，采用大肠杆菌原核表达系统重组表达及纯化CWL；观察CWL对兔红细胞的凝血作用；CCK-8法评价CWL(10、20、40、80μg·mL-1)对结肠癌HCT-116细胞的毒性；流式细胞仪检测CWL(40、80μg·mL-1)对HCT-116细胞凋亡的影响；划痕实验检测细胞迁移能力；Transwell小室法检测细胞侵袭能力；实时荧光定量PCR(qRT-PCR)实验分析Caspase-3、 Caspase-9、 BAX、 PARPmRNA表达水平；Westernblotting检测cleaved-Caspase-3、cleaved-Caspase-9、BAX、cleaved-PARP蛋白表达水平。结果 重组纯化获得相对分子质量为3×104的CWL；高质量浓度的CWL导致红细胞出现明显的凝血情况，随着CWL质量浓度的降低，其凝血活性逐渐下降，直至消失。与对照组比较，CWL对HCT-116细胞活性具有显著抑制作用（P<0.001）;40、80μg·mL-1 CWL可显著降低HCT-116细胞的迁移和侵袭能力（P<0.001），显著升高HCT-116细胞凋亡率（P<0.01、0.001）；显著升高Caspase-3、Caspase-9、BAX、PARP的mRNA表达水平（P<0.05、0.01、0.001），同时显著增加cleaved-Caspase-3、cleaved-Caspase-9、BAX、cleaved-PARP蛋白表达水平（P<0.05、0.01）。结论 CWL可通过线粒体凋亡途径促进HCT-116细胞凋亡并抑制其迁移和侵袭，从而发挥抗肿瘤作用。

• 单位
  温州大学; 温州医科大学; 安徽济人药业有限公司; 生命科学研究院