人pri-miR-155重组腺病毒的制备及其表达与活性鉴定

作者：黄钢; 王海燕; 王凯; 蒋建新; 白云

来源：免疫学杂志, 2010, (03): 246-250+254.

DOI：10.13431/j.cnki.immunol.j.20100057

• miR-155
• 重组腺病毒
• 免疫调控 miR-155
• Recombinant adenovirus
• Immunoregulation

目的制备表达人成熟miR-155的重组腺病毒,检测该免疫调控分子在肺癌细胞A549的表达及其生物学活性。方法以正常人基因组DNA为模板,PCR扩增约1000bp完整的pri-miR-155基因序列,克隆到T载体pTA2上,测序证实后,正向亚克隆入腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV中,构建pAdTrack-CMV/pri-miR-155重组质粒,与pAdEasy-1腺病毒骨架质粒重组并扩增后转染293FT细胞,进行重组腺病毒的包装、扩增,对其进行安全性、滴度的测定。用此腺病毒感染A549细胞,采用RT-PCR法检测成熟miR-155的表达,双报告基因法检测其干扰活性。结果构建的人pAdTra...

• 单位
  第三军医大学大坪医院; 中国人民解放军陆军军医大学