人类免疫缺陷病毒-1基因沉默后细胞凋亡及凋亡相关蛋白的表达研究

作者：许振宇; 何艳^*; 周泉; 黄娜; 肖新强; 郑煜煌

来源：中华传染病杂志, 2018, 36(02): 90-94.

• HIV-1
• 细胞凋亡
• RNA干扰
• HIV-1vpr基因
• c-IAP2

目的通过RNA干扰HIV-1vpr基因的表达后观察凋亡相关蛋白c-凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis protein, IAP)2的表达情况,同时检测各组Jurkat细胞的凋亡情况。方法将空载体(NC组)、HIV-1 vpr质粒(vpr组)、vpr+磷酸化RNAT-U6.1/Neo-vpr-56质粒(Si56组)、vpr+磷酸化RNAT-U6.1/Neo-vpr-160质粒(Si160组)分别转染Jurkat细胞并培养48 h,分别进行总RNA、蛋白提取,利用实时PCR检测vpr基因的表达,证实质粒转染成功,以实时PCR和蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白人类内源性抗凋亡蛋白(inhibitor of apoptosis protein 2 c-IAP2)的表达情况,流式细胞仪检测各组Jurkat细胞的凋亡情况。结果 vpr组、Si56组、Si160组均可检测到vpr基因的表达,与vpr组比较,Si56组、Si160组HIV-1vpr基因表达的mRNA水平均出现明显降低,分别下降82.2%、87.2%,差异均有统计学意义(均P<0.05)。与NC组比较,vpr组、Si56组及Si160组c-IAP2基因表达的mRNA水平明显升高,分别为NC组的3.75、2.49、2.65倍;但Si56组、Si160组c-IAP2基因表达的mRNA水平均低于vpr组,分别下降33.7%和29.5% ;蛋白质印迹法检测显示,c-IAP2蛋白表达水平与mRNA结果一致,其中Si56组、Si160组c-IAP2蛋白表达水平比vpr组分别下降42.2%和46.8% (均P<0.05)。NC组、vpr组、Si56组和Si160组均可检测到Jurkat细胞凋亡,与NC组比较,vpr组细胞凋亡率明显升高,为NC组的1.76倍,而Si56组和Si160组细胞凋亡率与NC组比较差异无统计学意义(均P>0.05);与vpr组比较,Si56组和Si160组细胞凋亡率明显降低,分别为19.26%和18.05%(P<0.05)。结论通过沉默HIV-1vpr基因可下调Jurkat细胞c-IAP2基因的转录和蛋白表达水平,抑制Jurkat细胞的凋亡。

• 单位
  中南大学湘雅二医院