利用CRISPR/Cas9系统构建SIRT1基因敲除的K562细胞株

作者：温后烺; 陈婧; 曾杰清; 彭流泉; 陈日玲; 马国达; 张海涛; 汪亚君^*

来源：广东医科大学学报, 2023, 41(05): 504-514.

• CRISPR-Cas9
• SIRT1
• 基因敲除
• K562
• 细胞增殖

目的 构建去乙酰化酶SIRT1基因敲除的K562单克隆细胞株，研究SIRT1基因对细胞增殖的影响。方法设计靶向SIRT1酶活性中的sgRNA编码序列，构建CRISPR/Cas9载体并转染K562细胞，嘌呤霉素筛选后单克隆化并扩增；采用基因组测序、PCR和免疫印迹的方法进行基因敲除效果鉴定；对选定的SIRT1基因敲除的单克隆做生长曲线检测。结果 目标质粒测序符合，质粒转染细胞后检测到基因组靶序列位置杂合峰，获得SIRT1基因敲除的单克隆3个，SIRT1基因敲除导致细胞增殖明显减缓。结论 成功构建了SIRT1基因敲除的细胞株，该细胞可作为血液系统疾病研究的有力工具。

• 单位
  广东医科大学; 广东医科大学顺德妇女儿童医院