热厉螨多重实时荧光PCR种属鉴定方法研究

作者：高志强; 汪琳^*; 朱忠武; 白子龙; 赵相鹏; 蒲静; 张伟; 刘环

来源：中国口岸科学技术, 2023, 5(09): 82-90.

• 内参靶标
• 热厉螨
• 多重荧光PCR

热厉螨为蜂房内寄生虫，可严重侵害蜜蜂幼虫和蛹，及时检出并采取防治措施，可使蜂群免受毁灭性损害。本研究在序列比对分析的基础上，分别针对亮热厉螨、梅氏热厉螨、柯氏热厉螨COⅠ基因，以及蜂16S rRNA基因（内对照）设计4对引物和5条探针，经体系优化建立了可快速鉴别检测3种热厉螨的多重荧光PCR检测方法，并对方法的分析性能进行了评价。结果显示，本方法针对病原靶标的最低检测限（LOD）分别为6.07 copies、5.67 copies和6.21 copies，不与其他蜂病病原核酸发生交叉反应。应用建立的多重荧光PCR检测方法对201份蜂及蜂产品进行检测，分别检出亮热厉螨阳性样品1份和梅氏热厉螨阳性样品1份，经测序及序列比对确认为相应热厉螨特异序列。本研究建立的含蜂内参靶标的多重实时荧光PCR方法特异、灵敏，并可对采样、核酸提取及扩增进行全程质控，为热厉螨的快速筛查和种属鉴定提供了可靠方法。