角蛋白18与剪切因子PSF相互作用介导PSF的膜易位并维持髓系白血病细胞的化疗敏感性

作者：任思楣^*; 龙璐瑶; 许成山

来源：北京大学学报(医学版), 2020, 52(02): 214-220.

DOI：10.19723/j.issn.1671-167X.2020.02.004

• 肿瘤耐药
• 多嘧啶结合蛋白相关的剪切因子
• 角蛋白18

目的:鉴定多嘧啶结合蛋白相关的剪切因子(polypyrimidine tract-binding protein-associated splicing factor,PSF)在髓系白血病细胞内的伴侣蛋白,探讨PSF在敏感HL60细胞和耐药的HL60/DOX细胞中易位细胞膜的模式和机制。方法:通过脂质体瞬时转染PSF真核表达载体过表达PSF,进一步结合流式细胞术在转染后24 h、48 h、72 h检测PSF在细胞膜上的表达水平。构建链亲和素结合肽(streptavidin binding peptide,SBP)和PSF的融合表达载体,转染载体,过表达SBP-PSF融合蛋白。通过链亲和素磁珠共沉淀法和质谱分析,鉴定PSF在细胞内的伴侣蛋白。在慢病毒载体中插入角蛋白18 (cytokeratin 18,K18)干扰序列,转染293T细胞制备病毒液。用慢病毒感染HL60和HL60/DOX细胞,获得稳定干扰K18的细胞株。结合流式细胞术检测干扰K18的HL60和HL60/DOX细胞中细胞膜上PSF的表达水平,由此证实CK18在HL60和HL60/DOX细胞中协同转运PSF易位细胞膜机制的异同。结果:瞬时过表达PSF后的24 h、48 h、72 h连续3 d检测细胞膜PSF表达水平,HL60敏感株细胞膜上PSF表达率分别为22. 4%±3. 5%、37. 9%±6. 0%、58. 3%±8. 8%;耐药株HL60/DOX细胞膜上PSF的表达率分别为4. 7%±0. 5%、3. 9%±0. 6%、2. 9%±0. 6%;各时间点下敏感株和耐药株的差异有统计学意义,P <0. 01。免疫共沉淀和质谱证实K18为PSF在细胞内的伴侣蛋白。干扰K18的表达后,再次分析细胞膜PSF表达,发现PSF在敏感株细胞膜上的表达水平由原来的48. 9%±5. 4%降至6. 2%±1. 0%;在耐药株细胞膜上的表达水平由9. 11%±1. 2%降至2. 21%±0. 51%。结论:K18是PSF在细胞内的伴侣蛋白,在敏感细胞中,K18与PSF相互作用可帮助PSF向细胞膜转运;而在耐药株中,由于该功能障碍导致PSF在胞内发生积累从而介导耐药性。

• 单位
  北京医院; 中国医学科学院北京协和医学院