H7N9禽流感病毒HA基因在杆状病毒中的表达及检测

作者：王平; 蔡明毅; 沈琦; 任静; 赵文良^*

来源：国际病毒学杂志, 2018, 25(02): 100-103.

• 禽流感
• 病毒
• 基因表达
• HA蛋白
• 杆状病毒表达系统

目的利用昆虫杆状病毒表达系统表达H7N9禽流感病毒血凝素(HA)基因,获得重组HA蛋白,并验证其活性。方法全基因合成H7N9禽流感病毒全长HA基因,将HA基因进行扩增并克隆到pFastBacI载体中,构建重组杆状病毒表达载体,经PCR鉴定后将其转染昆虫sf9细胞,再采用SDS-PAGE实验和免疫印迹法检测重组HA蛋白的表达。HA蛋白经纯化后,采用血凝试验鉴定其红细胞凝集活性。结果PCR结果显示重组杆状病毒表达载体的扩增产物大小约为4 000 bp, SDS-PAGE电泳显示纯化的表达蛋白分子量为63 KD,免疫印迹检查结果显示表达蛋白可以与特异性HA抗体进行反应,产生条带与理论大小相当。血凝试验结果显示表达的蛋白能使红细胞凝集,滴度为1:64。结论禽流感H7N9的HA蛋白在重组杆状病毒中获得表达,并具有血凝活性。

• 单位
  上海市静安区疾病预防控制中心