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摘要
目的克隆人肝癌组织中的Cyclin D1基因,并在毕赤酵母中表达Cyclin D1蛋白。方法从人肝癌组织中提取RNA,逆转录PCR扩增获得Cyclin D1 cDNA,将PCR产物进行TA克隆和DNA序列分析;阳性TA克隆Cyclin D1片段再亚克隆入毕赤酵母表达载体Ppic9k,甲醇诱导表达。结果逆转录PCR扩增得到约483 bp的DNA片段,TA克隆和DNA序列分析结果显示重组片段为人的Cyclin D1基因,Cyclin D1 cDNA亚克隆入Ppic9k栽体的NotI和EcoRI位点之间;甲醇诱导得到分子量约36KD的蛋白。结论成功克隆人肝癌组织中的Cyclin D1基因,并且在毕赤酵母中成功表达。
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单位内蒙古自治区人民医院
