茎环引物实时定量PCR技术用于检测异核苷修饰的siRNA的可行性研究

作者：王雨斯; 马元; 刘欣洁; 张礼和; 杨振军

来源：中国科学:化学 , 2015, 45(07): 710-718.

• 茎环引物实时定量PCR
• 异核苷
• 绝对定量
• 双标准曲线法

本文考察了茎环引物实时定量PCR技术用于定量检测D-/L-异核苷(D-/L-iso NA)修饰的siRNA的可行性.根据阈值循环数(Ct值)及异核苷修饰的siRNA模板的初始浓度的对数值(lgC)绘制了标准曲线,与siRNA的标准曲线进行对比,发现D-异尿苷(D-isodU)修饰的siRNA(D-isodU-siRNA)不影响茎环引物实时定量PCR过程,而L-isodU修饰的siRNA(L-isodU-siRNA)降低了逆转录效率,而使测得的Ct值偏高,且对逆转录效率的影响有浓度依赖性和修饰位点特异性.因此,对前者既可进行绝对定量也可进行相对定量,对于后者只能进行绝对定量.将上述方法应用于isodU-siRNA血清稳定性的检测,获得了更可靠的定量结果.运用双标准曲线法,可进行胞内isodU-siRNA的定量检测.