miR-136调控FDZ4通过WNT信号通路抑制非小细胞肺癌的增殖和诱导凋亡

作者：谢五菊; 王成存^*; 吴文汉

来源：中国老年学杂志, 2020, 40(16): 3542-3548.

DOI：10.3969/j.issn.1005-9202.2020.16.055

• miR-136
• FDZ4
• WNT信号通路
• 非小细胞肺癌
• 增殖
• 凋亡

目的探讨微小RNA-136(miR-136)是否靶向调控FDZ4及其是否通过调控WNT信号通路进而抑制非小细胞肺癌的增殖及促进细胞凋亡。方法运用qRT-PCR与Western印迹分别检测miR-136和FDZ4在不同非小细胞肺癌细胞株及正常肺上皮细胞中的表达;将miR-136 mimic、miR-con分别转染SPC-A-1细胞,分别将pcDNA-FDZ4、pcDNA与miR-136 mimic共转染于SPC-A-1细胞。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)与流式细胞仪分别检测SPC-A-1细胞的增殖与凋亡。双荧光素酶报告基因检测miR-136与FDZ4的相互作用。采用Western印迹法检测SPC-A-1细胞中细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)4、细胞周期蛋白(Cyclin)D1、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-9、Bax、Bcl-2及WNT信号通路相关蛋白表达。结果 qRT-PCR结果显示,miR-136在非小细胞肺癌细胞中的表达均明显低于正常肺上皮细胞,而FDZ4 mRNA表达显著上调,其中以SPC-A-1细胞变化最为明显(均P<0.05);MTT结果显示,转染miR-136 mimic后SPC-A-1细胞OD值与miR-con组比较明显减小,而共转染pcDNA-FDZ4后SPC-A-1细胞OD值明显增加(均P<0.05);流式细胞仪检测结果显示,转染miR-136 mimic后SPC-A-1细胞凋亡率显著高于miR-con组,而共转染pcDNA-FDZ4后细胞凋亡率显著降低(均P<0.05);miR-136能与FDZ4的3′UTR特异性结合,并可调控FDZ4的表达活性;Western印迹结果显示,不同非小细胞肺癌细胞中FDZ4表达均明显高于正常肺上皮细胞,miR-136过表达后CDK4、Cyclin D1、Bcl-2、β-catenin、c-Myc表达明显下调,而Caspase-9、Bax、GSK-3β表达明显上调(均P<0.05),共转染pcDNA-FDZ4后促进CDK4、Cyclin D1、Bcl-2、β-catenin、c-Myc表达,抑制Caspase-9、Bax、GSK-3β表达。结论 miR-136可调控FDZ4并可能通过抑制WNT信号通路活化进而抑制非小细胞肺癌细胞增殖与诱导细胞凋亡。

• 单位
  海南西部中心医院