本发明属于分析检测技术领域,公开了一种用于检测羧酸酯酶的荧光探针及其制备方法与应用。所述荧光探针为2#{2#[4#(4'#乙酸苯甲酯苯甲氧基#甲酰胺基)#苯乙烯基]#4H#苯并吡喃#4#基}#丙二腈,其具有式(Ⅰ)结构式。所述荧光探针用于检测羧酸酯酶。相比于现有的荧光检测技术,本发明所制备的荧光探针具有对羧酸酯酶高选择性响应、抗干扰性强、检测模式有效直观,且投入成本低,合成路线和方法简单,适合于放大生产和实际应用。