血液病毒组学样本制备方法的建立

作者：冯博; 陈立^*

来源：北京医学, 2022, 44(04): 353-357.

DOI：10.15932/j.0253-9713.2022.04.016

• 血液病毒组学
• 样本制备
• 方法学

目的 建立切实有效的血液病毒组学样本制备方法。方法 通过比较6个稀释梯度超离心病毒实验富集病毒效果，比较ACK红细胞裂解法和Ficoll密度梯度离心法制备白细胞的效果，使用DNase、RNase和Nuclease混合体系去除宿主核酸干扰，探索有效的实验方案和流程。使用HBV阳性血浆和HIV阳性血浆验证本研究建立的血液病毒组学样本制备方法的可行性。结果 超离心全血对HBV的富集效果不理想，超离心血浆对HBV的富集效果好，回收率最低为41.0%，最高达到100.0%。ACK红细胞裂解法比Ficoll密度梯度离心法得到的白细胞更全面(12.36×109/L比5.45×109/L)，且操作更为简单易行。使用DNase、RNase和Nuclease混合体系对样本进行消化处理，可明显降低宿主信息的干扰，将病毒reads数与总reads数的比例从<0.01%提升到4.56%。建立、优化了血液病毒组学样本制备的技术方法，并验证了该方法的可行性。结论 通过摸索血液病毒组学样本制备的实验流程和实验条件，克服了血液病毒组学样本制备过程中的一系列技术难点，初步建立了可实用的技术操作体系，为血液病毒组学的应用奠定了基础。

• 单位
  北京市红十字血液中心