护肝布祖热对CCl4诱导人肝星状细胞LX-2活化的作用及机制研究

作者：杨建华; 杨秀娟; 赵耀; 杜超; 胡君萍^*

来源：中药新药与临床药理, 2022, 33(10): 1315-1321.

DOI：10.19378/j.issn.1003-9783.2022.10.004

• 护肝布祖热
• 肝损伤
• 人肝星状细胞LX-2
• 四氯化碳
• TGF-β/Smad信号通路
• Jak/Stat信号通路
• 内质网应激信号通路

目的 探讨护肝布祖热(HGBZR)抗肝损伤的作用及机制。方法 体外培养人肝星状细胞 LX-2，采用MTT 法检测 LX-2 细胞存活率以确定四氯化碳(CCl4)造模浓度和药物干预浓度。细胞实验分为 6 组：空白组、模型组、阳性组(水飞蓟素，10 μg·mL-1)及 HGBZR 低、中、高剂量组(5、10、20 μg·mL-1)，除空白组以外，其余各组分别加入终浓度 5 mmol·L-1CCl4损伤干预 24 h，然后再进行药物干预 24 h。采用 MTT 法检测各组细胞存活率；Annexin V/PE 双染法检测细胞凋亡率；qRT-PCR 法检测各组细胞 α-平滑肌动蛋白(SMA)、TIMP-1、PTP1B、转化生长因子(TGF)-β、Smad3、Smad4、Smad7、CHOP、PERK、IRE1、ATF6 mRNA 表达情况；Western Blot 法检测各组细胞 Jak1、Stat3、TGF-β、Smad3、Smad4、Smad7、CHOP、Caspase12、核因子(NF)-κB p65 蛋白表达情况。结果 随着 CCl4浓度(5～30 mmol·L-1)升高，LX-2 细胞存活率逐渐下降，当 CCl4浓度为5 mmol·L-1时细胞呈现增殖状态，故选择 5 mmol·L-1CCl4处理 24 h 作为肝损伤模型复制条件。与模型组比较，HGBZR 中、高剂量组的细胞存活率明显降低(P<0.05)，细胞早期凋亡率和晚期凋亡率均明显升高(P<0.05);LX-2 细胞的 α-SMA、TIMP-1、TGF-β、Smad3、Smad4、CHOP、PERK、IRE1、ATF6 mRNA 表达水平明显降低(P<0.05),PTP1B、Smad7 mRNA 表达水平明显升高(P<0.05);LX-2 细胞的 Jak1、Stat3、TGF- β、 Smad4、 CHOP、 Caspase12 及 NF- κB p65(核蛋白)蛋白表达水平明显降低(P<0.05),Smad7、NF-κB p65(质蛋白)蛋白表达水平明显升高(P<0.05),Smad3 蛋白表达水平无明显变化(P>0.05)。结论HGBZR 可能通过调控 TGF-β/Smad、Jak/Stat 和内质网应激信号通路相关目标基因转录水平及蛋白表达，促进活化 LX-2 细胞的凋亡，对 CCl4诱导的化学性肝损伤具有一定保护作用。

• 单位
  新疆医科大学; 新疆医科大学第一附属医院