毒死蜱单克隆抗体制备及icELISA检测方法优化

作者：王伟华; 田木星; 韩占江

来源：食品安全质量检测学报, 2014, 5(06): 1709-1717.

DOI：10.19812/j.cnki.jfsq11-5956/ts.2014.06.024

• 毒死蜱
• 单克隆抗体
• icELISA
• 优化

目的制备毒死蜱单克隆抗体,建立icELISA(间接竞争酶联免疫吸附方法)检测方法并对其进行优化。方法以毒死蜱为基础物质,制备半抗原CPF-H1和CPF-H2,偶联蛋白制备人工抗原,进而通过免疫、细胞融合、筛选得到特异性的单克隆抗体,建立毒死蜱的icELISA检测方法,并对其分析条件进行优化。结果质谱鉴定结果表明毒死蜱半抗原制备成功;半抗原偶联蛋白,紫外全波长扫描鉴定人工抗原制备成功;免疫动物、细胞融合并制备单克隆抗体;建立了icELISA检测方法,优化得到最佳反应条件:PBST为标准品稀释液,包被抗原最佳稀释倍数为1:1000,抗体最佳稀释倍数为1:1000,一抗反应最佳时间为40 min,二抗反应最佳时间为30 min,制得毒死蜱标准曲线,毒死蜱对抗体的IC50为73-25 ng/mL,线性范围IC20IC80为32.52260ng/mL,LOD为19.34 ng/mL。结论本研究为毒死蜱快速检测技术奠定了理论基础,对保障人们的身体健康具有重要的意义。

• 单位
  塔里木大学; 生命科学学院; 新疆生产建设兵团; 新疆生产建设兵团塔里木盆地生物资源保护利用重点实验