光谱法表征蛋白酶K的热变性过程

作者：张奇兵; 那馨竹; 尹宗宁

来源：光谱学与光谱分析, 2013, (07): 1749-1753.

• 蛋白酶K
• 热稳定性
• 稳态荧光光谱
• 瞬态荧光光谱
• 圆二色谱 Proteinase K
• Thermal stability
• Steady-state fluorescence
• Time-resolved fluorescence
• Circular dichroism

用不同温度处理蛋白酶K,以变性酪蛋白底物法测定酶活力,稳态/瞬态荧光光谱法和圆二色谱法测定空间构象和二级结构,研究温度对蛋白酶K酶活力和构象的影响。温度由25℃升高至65℃过程中,蛋白酶K的酶活力逐渐降低,半衰期缩短;发射光谱荧光强度降低,峰位由335nm红移至354nm;色氨酸残基同步荧光强度降低,酪氨酸残基同步荧光强度增大;色氨酸残基荧光寿命由4.427 1ns降低至4.032 4ns;α-螺旋百分含量降低。结果表明:采用稳态/瞬态荧光光谱法和圆二色谱法能较简便、准确的描述蛋白酶K的热稳定性变化;蛋白酶K的热变性过程符合三态模型,存在一个中间态;蛋白酶K分子内部存在酪氨酸残基对色氨酸残基的...

• 单位
  四川大学