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摘要
目的探讨腺病毒介导的生长抑制因子4(ING4)和白细胞介素(IL)-24双基因共表达对NCI-H460肺癌细胞裸鼠移植瘤的抑癌增效作用及分子机制。方法根据腺病毒携带基因类型,把实验分5组,PBS、Ad、Ad-IL-24、Ad-ING4、Ad-ING4-IL-24组。以50的感染复数(MOI)各重组腺病毒分别感染NCI-H460细胞(苏州大学基础医学院细胞和分子生物学教研室提供),蛋白质印迹法(Western blot)鉴定ING4和/或IL-24基因在NCI-H460细胞中的表达;噻唑蓝(MTT)法检测各重组腺病毒对NCI-H460细胞的生长抑制作用;各重组腺病毒注入裸鼠瘤体内进行抗肿瘤实验,观察各组瘤体体积变化;治疗15 d后处死裸鼠、摘取瘤体并称瘤体质量;免疫组织化学检测瘤体组织中B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、生存素(Survivin)等相关因子的表达。统计学采用单因素方差分析。结果动物实验结果表明,腺病毒介导白细胞介素-24(Ad-IL-24)、腺病毒介导生长抑制因子4(Ad-ING4)、腺病毒介导白细胞介素-24及生长抑制因子4(Ad-ING4-IL-24)组的肿瘤平均体积明显低于腺病毒(Ad)组[(559.880±43.704) mm3,t=12.811,P<0.01;(573.720±42.019) mm3,t=13.654,P<0.01;(834.700±44.948) mm3,t=18.570,P<0.01]和磷酸盐缓冲液(PBS)组[(-710.210±32.608) mm3,t=21.780,P<0.01;(724.050±30.313) mm3,t=23.886,P<0.01;(-985.030±34.257) mm3,t=28.754,P<0.01],平均瘤体重量明显低于Ad组[(0.547±0.080) g,t=6.812,P<0.01;(0.607±0.082) g,t=7.433,P<0.01;(0.919±0.082) g,t=11.221,P<0.01]和PBS组[(0.572±0.067) g,t=8.597,P<0.01;(0.632±0.068) g,t=9.260,P<0.01;(0.944±0.069) g,t=13.775,P<0.01],差异均有统计学意义;Ad-ING4-IL-24组对裸鼠NCI-H460肺癌移植瘤的抑癌作用明显优于Ad-IL-24、Ad-ING4单基因组(0.302±0.048,t=6.213,P<0.01;0.250±0.053,t=4.685,P<0.01),差异有统计学意义,呈现抑癌增效相加作用(Q=0.940)。ING4和/或IL-24能够上调bax、Caspase-3等因子的表达,下调bcl-2、Survivin等因子的表达,且Ad-ING4-IL-24组优于Ad-IL-24、Ad-ING4单基因组(0.263±0.055,t=4.286,P<0.01),差异有统计学意义。结论 Ad-ING4-IL-24双基因共表达在体内对NCI-H460细胞裸鼠移植瘤均具有抑癌增效作用,其分子机制可能与上调bax、Caspase-3等促凋亡因子的表达,下调bcl-2、Survivin等凋亡抑制因子的表达有关。
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