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摘要
目的通过基因重组表达方法制备伤寒沙门菌外膜蛋白YncD,观察其免疫保护效果。方法通过PCR方法扩增伤寒沙门菌Ty2野生株的外膜蛋白YncD编码基因,构建原核表达载体pET28a-yncD,并测序鉴定。表达载体转入大肠埃希菌BL21,IPTG诱导表达重组蛋白,并通过亲和层析和离子交换柱进行纯化。获得的重组蛋白免疫接种小鼠,以Ty2株进行攻击,观察重组蛋白的免疫保护效果。结果经DNA测序鉴定,p ET28a-yncD原核表达重组载体构建成功,其在原核表达系统中表达量高,产物蛋白相对分子质量约为79 000,与预期相符。表达产物经亲和层析和离子交换柱纯化后,得到高纯度重组YncD蛋白。小鼠经重组YncD免疫接种后,可抵抗致死剂量的毒株攻击。结论成功构建伤寒沙门菌外膜蛋白YncD基因重组原核表达系统,并获得高纯度重组YncD蛋白,动物实验初步显示重组蛋白具有良好的免疫保护作用,为进一步的免疫保护效能评价奠定基础。
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