微小RNA-373靶定E2F转录因子5降低胶质瘤细胞恶性表型

作者：李巍; 王琴; 李旭; 阚鹏程; 颜艳^*

来源：中华实验外科杂志, 2018, 35(03).

• 微小RNA
• 微小RNA-373
• 胶质瘤
• 侵袭
• E2F转录因子5

目的观察微小RNA(miRNA,miR)-373对胶质瘤细胞恶性表型的影响,探讨miR-373调控胶质瘤发生发展的分子机制。方法利用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测胶质瘤组织及正常脑组织中miR-373的表达水平;利用噻唑蓝(MTT)比色法及Transwell侵袭实验检测miR-373对胶质瘤细胞U251活性及侵袭能力的影响;通过生物信息学方法,筛选miR-373的靶基因,利用荧光报告载体实验结合Real-time PCR和Western blot验证miR-373对靶基因的直接调控作用。结果将正常脑组织和人正常星形细胞株中miR-373的表达水平标化为1,胶质瘤组织和U251、U87、A172、U118细胞中miR-373的相对表达水平分别为0.36±0.14、0.21±0.04、0.32±0.05、0.35±0.04、0.56±0.12,差异有统计学意义(t=-7.862,P=0.006;t=-9.211,P=0.004;t=-8.090,P=0.005;t=-7.953,P=0.006;t=-6.254,P=0.007)。miR-373转染U251细胞48h后,细胞活性和侵袭能力与对照组比较显著降低[活性:0.25±0.03比0.63±0.08;穿膜细胞数:(41.5±5.7)个比(118.5±9.8)个;t=-12.561,P=0.002;t=-10.792,P=0.003]。过表达miR-373后,含有E2F转录因子5的3’端非编码区域(E2F5 3’UTR)的荧光报告载体的细胞组荧光值为1.49±0.21,对照组的荧光值为2.23±0.32,差异有统计学意义(t=-9.804,P=0.004)。结论 miR-373通过靶向抑制E2F5表达降低胶质瘤细胞的恶性生物学活性。

• 单位
  天津市环湖医院; 天津市神经外科研究所