猪流行性腹泻病毒N蛋白的真核表达及其亚细胞定位的初步分析

作者：吕茂杰; 冯力; 时洪艳; 陈建飞; 孙东波; 申识川; 崔小辰; 王承宝; 范秀萍

来源：畜牧兽医学报, 2009, (05): 691-696.

• 猪流行性腹泻病毒
• 核衣壳蛋白
• 真核表达
• 亚细胞定位 porcine epidemic diarrhea virus
• nucleocapsid protein
• eukaryotic expression
• subcellular localization

以构建的含有编码猪流行性腹泻病毒CV777株核衣壳蛋白(N)基因的阳性质粒pMDT-18-N为模板,用含有KpnⅠ和XhoⅠ酶切位点的上、下游引物扩增获得N基因,该PCR产物经KpnⅠ和XhoⅠ双酶切后定向克隆到经相同双酶切的真核表达载体pcDNA3.1(+)中,经过酶切鉴定和测序鉴定,将构建的重组质粒命名为pcD-NA3.1(+)-N,且未发现碱基的缺失和插入。用脂质体法将pcDNA3.1(+)-N转染Vero E6细胞,在48 h后,以针对猪流行性腹泻病毒核衣壳蛋白的鼠源`多抗血清进行Western blot、免疫荧光检测,并运用共聚焦显微镜分析N蛋白的亚细胞定位。结果表明N基因能在真核细...

• 单位
  东北农业大学; 兽医生物技术国家重点实验室; 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所