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摘要
研究麦冬皂苷D（ophiopogonin D,OPD）对异丙肾上腺素（isoproterenol, ISO）诱导大鼠心肌细胞凋亡的干预作用及可能的作用靶点蛋白，为麦冬皂苷类成分的心肌保护作用深入研究提供线索。CCK-8法检测麦冬皂苷D与异丙肾上腺素共处理对细胞存活率的影响；Western blot法检测麦冬皂苷D及ISO对内质网应激相关基因Bip、Bax、Perk、ATF4、caspase-12及CHOP表达的影响；流式细胞仪检测细胞凋亡率；Hoechst 33258和Tunel染色观察细胞凋亡及形态变化情况；特异性钙离子探针检测细胞内质网钙离子释放；通过构建OPD键合的环氧活化琼脂糖凝胶固相微球作为亲和介质，以捕获H9c2细胞裂解液中OPD所特异性结合的靶点蛋白；对高分辨质谱鉴定获得的OPD靶点蛋白进行信号通路富集分析并探讨OPD心肌细胞保护作用的潜在靶点。实验结果显示，10μmol·L-1的ISO可显著诱导内质网应激相关蛋白的表达，促进细胞发生早期凋亡。不同浓度的麦冬皂苷D可在一定程度上预防异丙肾上腺素引起的心肌细胞损伤。质谱结果显示Fam129a、Pdia6等19个麦冬皂苷D结合的靶点蛋白分别涉及ERN1传感器结合的未折叠蛋白反应、三羧酸循环及Nrf2信号转导途径等多个信号通路。以上结果表明OPD对心肌细胞具有明确的保护作用，可能通过多个靶点蛋白信号通路发挥作用并影响细胞生命进程。
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