含信号肽的结核分枝杆菌8.4/白细胞介素12嵌合基因真核表达质粒的构建、表达及免疫原性研究

作者：李晖; 李榕; 钟森; 任红; 邓存良; 史小玲; 王明勇

来源：中华结核和呼吸杂志, 2006, (04): 261-265.

DOI：10.3760/j:issn:1001-0939.2006.04.016

• 分枝杆菌
• 结核
• 疫苗
• 合成
• 免疫原性

目的构建和表达含信号肽的结核分枝杆菌8.4(MS)/人白细胞介素12(hIL-12)嵌合基因,并研究嵌合基因疫苗的免疫原性。方法克隆 MS/hIL12嵌合基因,导入真核表达载体 pCI-neo,构建成 MS/hIL12嵌合基因真核表达质粒,用限制性内切酶消化、聚合酶链反应(PCR)及 DNA 序列测定等多种分子生物学方法进行鉴定;重组嵌合质粒转染 COS-7细胞后,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹法(Western blot)鉴定 MS/hIL12嵌合基因的表达情况。将 MS/hIL-12嵌合基因疫苗免疫 C57BL/6N 小鼠,脾细胞培养上清检测细胞因子水平;并按效、靶比例分别为100∶1、50∶1、10∶1进行细胞毒 T 淋巴细胞(CTL)杀伤检测。结果 MS/hIL12嵌合基因重组真核表达质粒构建成功;转染 COS-7细胞后,MS/hIL12嵌合基因在转录水平成功表达。MS/hIL-12嵌合基因疫苗组免疫小鼠脾细胞培养上清中γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素2(IL-2)含量分别为(1 521±48)ng/L 和(755±41)ng/L,MS 基因疫苗组分别为(820±50)ng/L 和(297±31)ng/L,BCG 组分别为(1 487±40)ng/L 和(767±50)ng/L,空载体组分别为(121±16)ng/L 和(62±10)ng/L,PBS 组分别为(48±16)ng/L 和(32±17)ng/L,上述结果显示 MS/hIL-12嵌合基因疫苗组 IFN-γ、IL-2分泌量增加,明显高于 MS 基因疫苗组及对照组(P<0.01),与 BCG 组相当(P>0.05);BCG 组免疫小鼠脾细胞培养上清中白细胞介素4(IL-4)的含量为(91±11)ng/L,明显高于其他各组(P<0.01)。效靶比为100∶1、50∶1、10∶1时,MS/hIL12嵌合基因疫苗组的 CTL 活性分别为77.5%、51.2%、30.3%,MS 基因疫苗组分别为56.2%、37.8%、11.5%,BCG 组分别为28.9%、21.4%、9.8%,MS/hIL-12嵌合基因疫苗组的CTL 活性高于 MS 基因疫苗组、BCG 组、空载体组和 PBS 组(P<0.01)。结论 hIL-12与 MS 构建成嵌合基因疫苗后,MS 基因疫苗的免疫原性得到很大提高。

• 单位
  泸州医学院附属医院; 第二临床学院; 江西省南昌市血站; 军事医学科学院; 重庆医科大学