兔出血症病毒2型VP60蛋白特异性单克隆抗体的制备

作者：曾红梅; 庞雪晴; 唐诗; 杨泽晓; 罗燕; 王印; 姚学萍; 李丽

来源：农业生物技术学报, 2022, 30(10): 2053-2060.

• 兔出血症病毒2 (RHDV2)
• VP60蛋白
• 单克隆抗体
• Western blot

兔病毒性出血症(rabbit hemorrhagic disease, RHD)又称兔瘟，是由兔出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus, RHDV)感染引起的兔(Oryctolagus cuniculus)急性出血性传染病。为制备RHDV2的特异性单克隆抗体(McAb)，进而探索其与经典兔瘟病毒(RHDV)鉴别诊断技术，本研究原核表达纯化RHDV2 VP60蛋白(pET-32a-R2VP60蛋白)和RHDV VP60蛋白(pET-32a-R1VP60蛋白)，以p ET-32aR2VP60蛋白免疫BALB/c小鼠(Mus musculus)，并分别以p ET-32a-R1VP60蛋白与pET-32a-R2VP60蛋白为包被原建立特异性的RHDV2单克隆抗体筛选间接ELISA方法，采用常规杂交瘤细胞融合技术，通过克隆、亚克隆、腹水制备、效价测定、Western blot分析、血凝-血凝抑制试验以及亚型鉴定成功筛选出一株抗RHDV2的杂交瘤细胞株，命名为2A1。结果显示，2A1融合细胞的染色体约为100条，分泌IgG3亚型McAb，轻链为Kappa亚型；杂交瘤2A1的抗体分泌稳定，腹水纯化McAb效价高，特异性良好，其间接ELISA效价高达1∶128 000。Western blot分析显示McAb 2A1仅与RHDV2病毒粒子和p ET-32a-R2VP60蛋白反应，与RHDV1病毒粒子和pET-32a-R1VP60蛋白反应阴性。血凝(hemagglutination, HA)与血凝抑制(hemagglutination inhibition, HI)实验表明2A1纯化McAb可有效抑制RHDV2的血凝作用，HI效价高达10log2。本研究制备的RHDV2特异性McAb 2A1，为RHDV2特异快速的血清学诊断方法建立和试剂盒研发提供了科学材料。

• 单位
  四川农业大学; 四川省动物疫病预防控制中心