基于CRISPR/Cas9系统对乳酸乳球菌进行绿色荧光蛋白标记

作者：宋馨; 王慧; 袁世豪; 黄佳伟; 易文涛; 艾连中^*

来源：食品与发酵工业, 2022, 48(02): 163-167.

DOI：10.13995/j.cnki.11-1802/ts.029311

• 乳酸乳球菌NZ9000
• CRISPR/Cas9系统
• 绿色荧光蛋白

乳酸乳球菌是治疗剂在体内运送的良好载体,研究其在体内的真实运送情况需对其进行标记。该实验利用CRISPR/Cas9系统对乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)NZ9000进行增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein, eGFP)标记,用于研究乳酸乳球菌在体内的运送,评价其作为益生菌的功能。基于该实验室已构建的乳酸乳球菌CRISPR/Cas9编辑质粒pLL25构建重组质粒pYSH,其上携带eGFP及同源臂,电转入乳酸乳球菌NZ9000感受态细胞中,将基因组中的乳酸脱氢酶基因(ldh)替换为绿色荧光蛋白基因,从而使Lactococcus lactis NZ9000获得标记,表达绿色荧光蛋白。对绿色荧光标记的Lactococcus lactis NZ9000突变株,酶标仪定量分析eGFP的表达强度。荧光强度定量分析结果表明,在乳酸乳球菌不同生长阶段,eGFP基因均能稳定表达。

• 单位
  上海理工大学