piggyBac转座子介导的牛A-FABP表达载体的构建与鉴定

作者：杨宁; 昝林森; 成功; 付常振; 李耀坤

来源：西北农林科技大学学报(自然科学版), 2013, (09): 8-14+20.

DOI：10.13207/j.cnki.jnwafu.2013.09.034

• piggyBac转座子
• A-FABP基因
• 表达载体
• 牛成纤维细胞 piggyBac transposon
• A-FABPgene
• expression vector
• bovine fibroblasts

【目的】构建以piggyBac(PB)转座子为载体元件,绿色荧光蛋白(EGFP)为报告基因,Neomycin(NEO)为抗性基因,alpha-肌动蛋白(α-actin)为启动子的A-FABP基因特异性表达载体pPB-AFABP,并验证其转座活性。【方法】通过PCR方法合成PB转座子骨架序列、NEO-EGFP、α-actin启动子以及A-FABP基因序列,并将各个序列连接构建成转基因载体pPB-AFABP;用脂质体法将供体质粒pPB-AFABP和辅助质粒pCAG-PBase组成的PB二元系统及质粒pPB-AFABP分别转染牛成纤维细胞,通过G418筛选得到转基因细胞。【结果】经过酶切和测序鉴定,...

• 单位
  西北农林科技大学; 国家肉牛改良中心