慢性肾功能不全幼鼠脊柱椎体生长板甲状旁腺激素相关蛋白受体低表达对椎体发育的影响

作者：王小健; 路晓; **; 李亚峰; 马月宏; 郭松佳; 张宇明; 常峰; 苏云星; 李荣山^*

来源：中华小儿外科杂志, 2020, 41(06).

• 肾机能不全, 慢性
• 脊柱
• 甲状旁腺激素相关蛋白质
• 生长板

目的探讨慢性肾功能不全幼鼠脊柱椎体生长板区甲状旁腺激素相关蛋白(Parathyroid hormone-related protein, PTHrp)受体表达对椎体发育的影响。方法将60只2周龄的雄性Sprague-Dawley大鼠按每组20只, 平均分为假手术组、模型组和治疗组。假手术组大鼠切开暴露左侧输尿管后缝合, 模型组大鼠行左侧输尿管结扎, 治疗组大鼠行左侧输尿管结扎并用依那普利治疗。术后4周, 3组各处死10只大鼠并检测其血PTHrp浓度。拍摄脊柱正位X线片测量腰椎1～腰椎6长度, 组织学切片观测脊柱椎体生长板增殖区组成细胞柱的细胞数量, 免疫组织化学检测椎体生长板区PTHrp受体表达。将每组剩余大鼠处死后提取椎体生长板区软骨细胞进行体外培养至P3代, 原位杂交检测PTHrp受体mRNA表达, 并应用PCR行定量分析;免疫荧光检测PTHrp受体蛋白表达, 并用Western-blot行定量分析。应用EDU技术检测细胞24 h增殖率。最后应用单因素方差分析对各组间差异进行统计学分析。结果假手术组、模型组和治疗组大鼠血PTHrp浓度分别为(0.48±0.14)ng/L、(1.05±0.21)ng/L和(0.70±0.19)ng/L, 另两组与假手术组比较, 差异均有统计学意义(P均<0.05)。模型组和治疗组腰椎1～腰椎6长度分别为(44.6±11.5)mm和(46.8±13.5)mm, 均较假手术组(58.1±9.6)mm短, 且差异有统计学意义(P均<0.05);模型组和治疗组椎体生长板增殖区细胞柱细胞数分别为(2.3±1.1)个和(2.1±1.4)个, 均较假手术组(4.1±1.2)个减少, 且差异有统计学意义(P均<0.05)。免疫组织化学结果显示, 假手术组PTHrp受体高表达, 定量分析评分为(7.1±1.8)分;治疗组次之, 为(5.4±2.1)分, 模型组表达最少, 为(3.6±1.9)分, 组间比较, 差异均有统计学意义(P均<0.05)。模型组和治疗组体外培养软骨细胞内PTHrp受体mRNA相对表达量分别为0.24±0.14和0.36±0.13, 均低于假手术组1.01±0.32, 且差异有统计学意义(P均<0.05)。模型组和治疗组细胞24 h增殖率分别为(8.7±2.6)%和(14.3±7.1)%, 均低于假手术组(21.4±7.3)%, 且差异有统计学意义(P均<0.05)。结论慢性肾功能不全幼鼠血液PTHrp浓度增高, 椎体生长板区软骨细胞PTHrp受体由于负反馈原因表达减少, PTHrp无法发挥促进增殖作用, 最终导致椎体发育障碍。

• 单位
  山西省人民医院