miR-100基因敲除小鼠模型的构建及基因型鉴定

作者：乔思源; 江文刚; 汪思应^*

来源：安徽医科大学学报, 2021, 56(04): 510-513.

DOI：10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2021.04.002

• miR-100
• 基因敲除
• 基因型鉴定
• 繁育

目的探讨miR-100基因敲除小鼠模型的构建及基因鉴定。方法将引进的miR-100flox/flox小鼠与EIIa-Cre小鼠进行交配繁育出F1代小鼠,将F1代小鼠中基因型为miR-100flox/-的雌雄小鼠继续进行交配,获得F2代小鼠,待小鼠1周龄时剪尾部组织提取DNA,PCR法扩增目的基因片段,琼脂糖凝胶电泳进行基因型结果判定。结果结果显示有所需要的miR-100基因敲除纯合子小鼠,将获得的敲除纯合子小鼠再交配,就可获得更多的基因敲除纯合子小鼠。F1代杂合子小鼠交配获得的F2代小鼠中出现3种基因型:miR-100flox/flox、miR-100flox/-、miR-100-/-,使用PCR法成功鉴定出了子代小鼠的基因型。同时剪取miR-100敲除纯合子小鼠、miR-100flox/flox小鼠及miR-100敲除杂合子小鼠的耳朵提取RNA,然后进行qRT-PCR验证miR-100的表达情况。qRT-PCR结果显示,miR-100基因全身敲除纯合子小鼠的耳朵中miR-100的表达几乎为零。结论该实验成功配繁出miR-100基因全身敲除的小鼠模型,为后续实验提供基础。

• 单位
  安徽医科大学