两种酶消化法对小鼠脑胶质瘤浸润性免疫细胞分离的影响

作者：段瑾; 杜铭; 王笑; 孙逊^*

来源：国际免疫学杂志, 2019, (04): 337-342.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1673-4394.2019.04.001

• 小鼠胶质瘤
• 肿瘤浸润免疫细胞
• 流式细胞术
• 酶消化法

目的 对比胰酶消化法和混合酶(Ⅱ型胶原酶＋Ⅰ型DNA酶)消化法分离小鼠胶质瘤浸润免疫细胞的效果。方法 没有分组情况提取接种GL261胶质瘤细胞系21天后C57BL/6小鼠的脑组织,剪碎后A组用胰酶消化法,B组采用混合酶(Ⅱ型胶原酶＋Ⅰ型DNA酶)消化法分别消化组织,通过Percoll密度梯度离心法获取肿瘤浸润免疫细胞,使用流式细胞术比较提取免疫细胞的表型特点。结果 混合酶(Ⅱ型胶原酶＋Ⅰ型DNA酶)消化法(B组)后,提取的小胶质细胞上CD11b的荧光强度比胰酶消化的A组强(P<0.05)；肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophages,TAM)、浸润的淋巴细胞、CD8＋T细胞的比例和数量明显高于A组胰酶消化后得到的细胞(P<0.05)；CD4＋ T细胞的数量明显高于A组胰酶消化后得到的细胞(P<0.05)。结论 混合酶(Ⅱ型胶原酶＋Ⅰ型DNA酶)消化法得到的肿瘤浸润免疫细胞增多,细胞表面膜蛋白不受破坏,适用于对胶质瘤浸润免疫细胞的分析。

• 单位
  中国医科大学; 基础医学院