白桦脂酸通过RRAGD/mTOR/ULK1促进自噬改善血管平滑肌细胞钙化

作者：侯炽均; 陈鑫; 曹艳红; 张钰冰; 张靖悦; 王陵军; 王婷; 叶小汉; 郭依宁^*

来源：中华中医药学刊, 2023, 1-10.

• 血管平滑肌细胞
• 细胞钙化
• 白桦脂酸
• 自噬

目的：探讨白桦脂酸(Betulinic acid，BA)对高磷诱导血管平滑肌细胞钙化的作用机制。方法：采用2.6 μmol·g-1高磷诱导小鼠主动脉平滑肌细胞体外钙化模型，CCK8检测白桦脂酸对细胞活力的影响；加入白桦脂酸低、中、高剂量(5 μmol·L-1、10 μmol·L-1、20 μmol·L-1)及自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA，5 μmol·g-1)。慢病毒过表达Ras相关GTP结合蛋白D(Ras-related GTP-binding Protein D，RRAGD)转染血管平滑肌细胞，通过荧光显微镜、RT-PCR验证转染效率。采用茜素红染色、细胞内钙含量、碱性磷酸酶活性检测细胞钙化程度；Western blot检测血管平滑肌细胞钙化指标RUNT相关转录因子2(Runt-related transcription factor 2，RUNX2)，骨形态发生蛋白2(Bone morphogenetic protein，BMP2)，平滑肌蛋白22α(Smooth muscle protein 22α，SM22α)和平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin，α-SMA)；UNC-51样激酶1(UNC-51-like kinase 1，ULK1)，自噬蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3Ⅱ/LC3Ⅰ)，泛素结合蛋白P62(P62)，哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(Mammalian target of rapamycin，mTOR)以及RRAGD的表达。结果：根据CCK8细胞活力结果选择白桦脂酸5、10、20 μmol·L-1剂量进行后续实验；钙水平、碱性磷酸酶活性及茜素红染色实验结果显示白桦脂酸改善高磷诱导血管平滑肌细胞钙化；Western blot结果显示白桦脂酸下调RUNX2、BMP2、RRAGD、p-mTOR、P62(P<0.05)，上调SM22α、α-SMA、LC3Ⅱ/Ⅰ、p-ULK1的蛋白表达(P<0.05)。白桦脂酸减轻高磷诱导血管平滑肌细胞钙化的作用被自噬抑制剂3-MA和过表达RRAGD阻断。结论：白桦脂酸可能通过RRAGD/mTOR/ULK1信号通路促进自噬抑制血管平滑肌细胞钙化。

• 单位
  广州中医药大学第一附属医院; 第一临床医学院; 广州中医药大学