细粒棘球绦虫TAK1基因ORF的克隆及其蛋白生物信息学分析

作者：刘丽英; 李军; 张文宝; 吴军^*; 杨梅^*

来源：中国病原生物学杂志, 2022, 17(12): 1392-1398.

DOI：10.13350/j.cjpb.221206

• 细粒棘球绦虫
• TAK1
• 生物信息学分析
• PCR

目的 克隆细粒棘球绦虫(Eg)TAK1基因的开放阅读框(ORF)全长，预测其编码的蛋白EgTAK1的结构特点和生物学功能。方法 从新疆株细粒棘球蚴中扩增EgTAK1-ORF全长，克隆至载体pMD20-T上并测序；从NCBI蛋白质数据库中下载EgTAK1的氨基酸序列，利用生物信息学分析软件分别对EgTAK1的理化性质、磷酸化位点、O-糖基化位点、N-糖基化位点、亲/疏水性、保守结构域、跨膜结构域、信号肽序列进行预测；采用MEGA 7.0软件对不同物种来源的TAK1蛋白进行多序列比对并构建系统进化树。采用实时荧光定量PCR检测细粒棘球绦虫在不同发育阶段TAK1基因mRNA的相对表达量。结果 EgTAK1基因ORF全长1 116 bp,编码371个氨基酸，理论等电点为5.97,不稳定指数为49.59,属于不稳定蛋白；脂肪系数为87.22,总平均亲水系数为-0.291,为亲水性蛋白；EgTAK1蛋白含有64个磷酸化位点，3个O-糖基化潜在位点，4个N-糖基化位点；EgTAK1蛋白属于蛋白激酶C类似(PKC-like)家族；无跨膜结构和信号肽，亚细胞可能定位于细胞膜、细胞质及细胞核内。该蛋白含有7个优势B细胞抗原表位，具有良好的免疫原性。二级结构包含34.77%的α-螺旋，5.12%的β-转角，40.97%的无规卷曲，19.14%的延伸链。TAK1蛋白同源序列比对中与多房棘球绦虫的TAK1同源性最高为83%。实时荧光定量PCR显示，细粒棘球绦虫在不同发育阶段EgTAK1表达有差异，成虫阶段相对表达量最高。结论 基因EgTAK1可能是细粒棘球绦虫发育分化的重要调控基因，预测该基因编码的蛋白含有B细胞抗原表位，有可能成为包虫病免疫学预防及药物研制的靶标抗原。

• 单位
  新疆医科大学; 新疆医科大学第一附属医院; 公共卫生学院; 基础医学院