含MGMT及增强荧光蛋白真核表达载体的构建

作者：李栋博; 王季石; 孙海燕; 方琴; 李伟达; 徐伟

来源：贵州医药, 2005, (10): 7-10+99.

• O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶
• 耐药基因
• 真核表达
• 基因克隆

目的克隆O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)基因,测序鉴定正确后构建含增强荧光蛋白(EGFP)的真核表达栽体。方法利用RT-PCR从人正常肝细胞中克隆MGMT并与克隆栽体pGEM-T载体相连接。经PCR、酶切及测序鉴定证明克隆成功后用限制性内切酶切下MG- MT片段,同时酶切载体pIRES2-EGFP。凝胶纯化回收后重组构建真核表达载体并鉴定。结果测序结果显示所克隆的编码序列与GeneBank公布MCMT cDNA序列一致。真核表达栽体的PCR及酶切鉴定结果与预期结果一致。结论成功克隆了耐药基因MGMT并构建了含EGFP编码序列的真核表迭载体pIRES2-MGMT-EGFP,为MGMT的进一步相关研究奠定了坚实基础。

• 单位
  贵阳医学院附属医院