基于比色法原理的新冠病毒主蛋白酶小分子抑制剂高通量筛选模型的优化与应用

作者：闫干干; 闫浩浩; 刘志成; 戚海燕; 刘晓丽; 刘晓平; 张晶^*; 陈云雨^*

来源：药学学报, 2022, 57(10): 3019-3026.

DOI：10.16438/j.0513-4870.2022-0365

• 新冠病毒
• 主蛋白酶抑制剂
• 比色法
• 荧光共振能量转移
• 荧光偏振
• 白果新酸

本研究优化并建立了新冠病毒主蛋白酶(main protease, Mpro)小分子抑制剂比色法高通量筛选模型,以期快速筛选天然产物来源的新型苗头化合物。基于比色法原理,以TSAVLQ-pNA (para-nitroanilide)作为Mpro水解底物,通过优化pNA底物浓度、Mpro工作浓度、最佳反应时间、二甲基亚砜耐受浓度等影响因素,建立Mpro小分子抑制剂比色法高通量筛选模型并用于天然产物化合物库的快速筛选。通过一系列反应条件优化,选择0.4μmol·-1Mpro和100μmol·L-1pNA底物,成功地建立了Z’因子值为0.9的比色法高通量筛选模型。通过对天然产物化合物库进行高通量筛选,证实了白果新酸(ginkgolic acid C13:0)在体外对Mpro酶活性具有良好的竞争性抑制作用。本研究成功建立了新冠病毒Mpro小分子抑制剂比色法高通量筛选模型,为抗新冠病毒药物先导化合物的筛选与发现奠定了实验基础。

• 单位
  中国医学科学院医药生物技术研究所; 皖南医学院