孕酮减轻ATP诱导的SH-SY5Y细胞损伤

作者：李秀娟; 沈慧; 魏林郁; 王国红; 张利彬; 李超堃; 李新娟; 王璐; 赵红岗; 宋景贵; 李东亮

来源：中国病理生理杂志, 2017, 33(09): 1587-1592.

• 孕酮
• 腺苷三磷酸
• 嘌呤能P2X7受体
• SH-SY5Y细胞

目的:探讨孕酮对抗腺苷三磷酸(ATP)诱导的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞损伤的神经保护作用和机制。方法:取对数生长期的SH-SY5Y细胞按照孕酮或ATP浓度的不同进行分组,CCK-8法检测细胞存活率,YO-PRO-1染色检测细胞膜通透性,Fluo-3染色检测细胞内Ca2+浓度的变化,Western blot法检测嘌呤能P2X7受体表达的变化。结果:与对照组相比,不同浓度(1、3、5和7 mmol/L)ATP作用2 h,SH-SY5Y细胞存活率显著降低(P<0.05),细胞摄入YO-PRO-1的荧光强度明显增加(P<0.05),且呈剂量依赖性。浓度为3、10和30 nmol/L的孕酮预孵育30 min可减轻ATP损伤作用,细胞存活率较单纯ATP组明显升高(P<0.05或P<0.01)。孕酮(30nmol/L)或P2X7受体拮抗剂KN-62(500 nmol/L)预孵育30 min均可显著抑制ATP诱导的胞内YO-PRO-1的荧光增强(P<0.01),而孕酮和KN-62两者之间没有明显差异。正常组细胞内钙离子含量少,ATP组细胞内钙离子荧光强度较对照组明显增高(P<0.05),孕酮(30 nmol/L)或KN-62(500 nmol/L)预孵育30 min可明显降低(P<0.05)ATP诱导的胞内钙荧光增强,而孕酮和KN-62两者之间的作用无明显差异。ATP组SH-SY5Y细胞P2X7受体表达较对照组明显增加(P<0.05),而孕酮(30 nmol/L)预孵育30 min则可显著降低ATP诱导的P2X7受体表达(P<0.05)。结论:孕酮可抑制ATP诱导的P2X7受体表达、膜孔形成和胞内Ca2+升高,降低细胞死亡率,明显减轻高浓度ATP对SH-SY5Y细胞的损伤作用。

• 单位
  新乡医学院; 新乡医学院第三附属医院