李坏死环斑病毒诱导的桃PpPDS沉默体系的优化及验证

作者：潘佳佳; 张东梅; 孟建; 高苏南; 朱凯杰; 刘军伟^*; 李国怀

来源：园艺学报, 2023, 50(07): 1587-1600.

DOI：10.16420/j.issn.0513-353x.2022-0484

• 桃
• 病毒诱导的基因沉默
• 李坏死环斑病毒
• 八氢番茄红素脱氢酶
• 叶绿素合成基因

病毒诱导的基因沉默（virus-induced gene silencing,VIGS）是在桃（Prunus persica）上进行基因沉默的主要手段，现有VIGS体系效率较低，亟待开发针对桃的高效沉默体系。以桃八氢番茄红素脱氢酶（Phytoene desaturase）基因PpPDS为指示基因，探究不同侵染方式、病毒载体、温度、接种苗龄和菌液浓度对桃叶片VIGS效率的影响。结果表明，在侵染方式上，叶片注射是有效的方式；李坏死环斑病毒（Prunus necrotic ring spot virus,PNRSV）载体（pCaRNA1/2和pCaRNA3）优于烟草脆裂病毒（Tobacco rattle virus,TRV）改造后的TRV载体（pTRV1和pTRV2）；温度为22℃左右PpPDS的沉默效率较高；苗龄为5～6片完全展开叶的桃苗沉默效率较高，达到85%；菌液浓度为OD600=1.0时沉默效率较高。以优化好的VIGS体系参数，选择桃叶绿素合成基因（PpGluTR和PpPOR）为目标基因进行验证，结果显示PpGluTR和PpPOR的表达均被显著抑制，叶片颜色变化明显。这些结果表明优化的VIGS体系稳定性好且沉默效率高，可用于桃基因功能的研究。

• 单位
  华中农业大学; 园艺林学学院