携带靶向沉默LSD1基因表达shRNA慢病毒载体的构建与鉴定

作者：李妍; 田昕; 孟凡东; 隋承光; 吴迪; 付立业; 刘云鹏; 姜又红

来源：现代肿瘤医学, 2015, 23(02): 145-149.

• LSD1基因
• RNA干扰
• 胃癌

目的:构建慢病毒干扰LSD1表达的载体并鉴定。方法:设计并合成3对针对LSD1基因的shRNA链,退火形成双链,与酶切的质粒连接,转化DH5a菌株,提取质粒,进行酶切鉴定和测序分析。脂质体法转染人胃癌MKN-28细胞,通过荧光倒置显微镜判定转染效率,并通过real time-PCR法检测细胞中LSD1基因的表达水平。结果:经酶切鉴定筛选出的重组质粒测序结果与目的序列相同,重组质粒构建成功;转染胃癌MKN-28细胞后,LSD1基因在mRNA水平的表达降低。结论:成功构建了靶向LSD1基因的shRNA慢病毒载体,并筛选出1种对LSD1基因有显著抑制作用的shRNA。

• 单位
  中国医科大学附属第一医院