新型冠状病毒核酸混采对检测结果的影响

作者：闫颖; 常乐; 姬慧敏; 宋诗; 肖瑛子; 卢卓群; 王露楠^*

来源：中华检验医学杂志, 2021, 44(05).

• 新型冠状病毒
• 核酸检测
• 混采

目的评估新型冠状病毒(2019-nCoV)样本混采对提取、扩增步骤的影响。方法取10只阴性咽拭子储存在6 ml病毒保存液中, 充分混匀后1∶2、1∶10稀释, 加入灭活2019-nCoV病毒培养液, 以模拟10混1、5混1和单人份检测。使用a、b、c 3种提取方式和体系不同的核酸提取试剂及A～E 5种模板上样量和检测灵敏度不同的扩增试剂分别进行提取和扩增。结果对于相同的模拟混采样本, a提取的模板比b、c提取的模板检测循环阈值(Ct)分别提前2.10±0.47和3.46±0.62;扩增相同的混采核酸模板, A试剂的N基因Ct值比B试剂提前1.16±0.48, ORF1ab基因Ct提前2.36±0.54。扩增体系中加入10拭子核酸使A试剂检测Ct值滞后1.36±0.32, 对B试剂无影响。使用a试剂提取, 10混1混采后, C、D、E试剂的扩增Ct值比检测单拭子样本高1.66±0.39。对于400拷贝/ml的10混1样本, C、E试剂均可检出, D试剂的N基因漏检。结论混采引入的大量人基因组DNA干扰提取和扩增效率。在加大样本提取体积、提高提取试剂性能的同时, 应选择大模板量上样、检测灵敏度高的扩增试剂, 方可提高系统灵敏度和结果稳定性, 大大降低漏检风险。

• 单位
  北京医院; 中国医学科学院