真核表达质粒pCMV-脂联素的构建及其转染对高糖环境下肾系膜细胞增殖影响的研究

作者：冯敏; 温俊平; 吕琦; 黄国良

来源：中国糖尿病杂志, 2017, 25(07): 649-654.

• 真核表达质粒
• pCMV-脂联素
• 肾系膜细胞
• 转染
• 细胞增殖

目的构建pCMV-脂联素(APN)真核表达质粒,观察转染小鼠肾系膜细胞后APN的表达以及对高糖环境下肾系膜细胞增殖的影响。方法通过RT-PCR扩增小鼠肾系膜细胞中APN基因片段,经酶切、纯化后与pcDNA3.1质粒连接构建pCMV-APN重组质粒。pCMV-APN重组质粒经酶切鉴定及DNA测序验证后,由脂质体转染将pCMV-APN真核表达质粒转导入肾系膜细胞中,Western blot检测转染后细胞中APN蛋白表达,MTT检测转染后细胞在高糖环境下增殖活性的变化。结果真核表达质粒pCMV-APN经酶切、测序鉴定后提示构建成功。转染后肾系膜细胞APN蛋白表达明显增高,且在高糖环境下的增殖活性较空载体转染组明显下降[(0.87±0.06)vs(0.60±0.01),P<0.05]。结论成功构建pCMV-APN真核表达质粒,能稳定表达于小鼠肾系膜细胞及抑制高糖的诱导增殖作用,为进一步研究APN的生物学功能奠定理论基础。

• 单位
  福建医科大学附属协和医院; 福建省立医院